蔡司LSM-900共聚焦显微镜扫描图像不清晰问题原因排查
1、扫描最终图像清晰度不高
造成此类问题的原因主要有两个：
①物镜和ZOOM值选用不正确：
初学使用者大多喜欢选用共聚焦显微镜10x物镜后，再将ZOOM值调到所需要的Zda值。通过ZOOM值的增大确实可以将图像放大，有助于看清图像的细节，但是ZOOM的增大是有限定的，这取决于物镜的倍率。例如在10x物镜下，ZOOM值超过10就没有意义了，而且ZOOM值的增大属于电子放大，放大倍数越高，清晰度越差。所以在所观察的样本形态体积较小的情况下，多采用高倍物镜(例如63x水镜或油镜)，再适当调整ZOOM值，ZOOM值Z好不超过2。
②误将Z-Position旋转球的功能和共聚焦显微镜焦距微调旋转器的功能等同：
在准确调焦的基础上，通过Z-Position旋转球的左右调节，可以观察到目标样品图像由Z轴距离变化而引起的图像清晰度的改变，感觉上和通过调焦使图像变清晰一样。因此很多使用者在没有调焦准确的情况下，直接使用-Position旋转球来调整图像清晰度而导致成像模糊。
2、扫描背景强，图像质量差
解决这个问题的关键在于要根据样品的制备质量选取合适的针孔大小，调整激光管电压、光电倍增管功率、信噪比等参数到Z佳状态。这些参数或设置有非常密切的关系，选择时应该综合考虑。
还有一种明场出现环状波纹背景的情况是由于操作者在使用共聚焦显微镜观察荧光样品后，没有将荧光滤镜退出并切换到扫描状态所致。此时只需要转动调节轮至Scan即可。
3、串色
在使用多种荧光染料标记样品时或是样品本身有很强的自发荧光时，串色的现象就很容易发生。串色又分为两种情况：
①两种荧光染料的激发光谱没有重叠，但是吸收光谱有重叠。这类串色可以通过顺序扫描(又称序列扫描)来完成：即先使用一种荧光染料的激发光扫描一张图片，再使用另外一种荧光染料的激发光扫描第二张图片。
②两种荧光染料的激发光谱和吸收光谱都有重迭，这种情况只能通过光谱扫描解决。
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